擬南芥培育方法-寧波東南儀器有限公司

擬南芥作為高等植物的模式生物被*的植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室廣泛研究。然而，照顧好這種小植物可能不是那么容易。這里介紹一個(gè)馬里蘭大學(xué)帕克學(xué)院的HevenSze實(shí)驗(yàn)室的通用指南。Sze實(shí)驗(yàn)室及其他實(shí)驗(yàn)室的成員為建立這個(gè)在實(shí)驗(yàn)室培育擬南芥的通用指南做出了許多努力。

二、步驟

1. 準(zhǔn)備種植用土

我們使用Miracle-Gro混合土（2立方英尺一袋）與Miracle-Gro8夸脫.MiracleGro珍珠巖來(lái)培養(yǎng)擬南芥，在一個(gè)可以放下2袋混合土的大容器中和土，1袋混合土（2立方英尺）混入半袋珍珠巖（4夸脫）。

注意：Sze實(shí)驗(yàn)室在裝土之前經(jīng)常將土滅菌！（方法如下）

（1）將干土放入滅菌容器中，直至與頂部相差一英寸，將土拍實(shí)。

（2）用鋁箔紙將容器封住，在每一個(gè)容器上放一張滅菌用膠帶，纏好。確保容器外沒(méi)有土，放入滅菌鍋。

（3）用常規(guī)/秒速/快速模式滅菌30~50 min，滅菌模式及時(shí)間取決于滅菌的容器數(shù)量。

（4）當(dāng)溫度降至室溫，將土放入花盆，輕輕壓實(shí)。記住將滅菌土保存好，避免種子或菌類污染。滅過(guò)菌的土至少可以使用兩星期，如無(wú)需要請(qǐng)不要多次滅菌。

（5）將花盆用去離子水浸沒(méi)（不要超過(guò)土表面）用humidomes覆蓋，使其吸水3-6小時(shí)或過(guò)夜。吸水后應(yīng)該還保存約1英寸高的水，如果沒(méi)有請(qǐng)?zhí)硭?/font>

（6）此時(shí)的土可以用于種植擬南芥。

2. 種子消毒

方法A

（1）取適量種子（野生型、突變體或互補(bǔ)株系）置于一個(gè)EP管中，加1 ml 消毒溶液。

消毒溶液：

20%Chlorox消毒液

0.05%Tween-20

用新滅過(guò)菌的無(wú)菌水配制。

（2）用振蕩器以zui大速度震蕩20-30秒。

（3）放置7-10 min，偶爾震蕩一下。

（4）8 000 rpm 離心5秒。

（5）仔細(xì)將水倒出。

（6）加1 ml 無(wú)菌水，震蕩重旋種子。

（7）8 000 rpm 離心5秒，倒去上清。

（8）重復(fù)步驟6-7，重復(fù)四次。

（9）將滅菌的種子移到底部鋪有無(wú)菌濾紙的小Fisher盤（100×15 mm）中。

（10）將種子用鑷子移到瓊脂培養(yǎng)基或土中，鑷子在70%乙醇中浸泡>30 min。

方法B

（1）將適量種子放入1.5 ml EP管中。加入1 ml 70%乙醇。

（2）將水倒出，加入5 ml 70%乙醇，放置5分鐘。

（3）用無(wú)菌去離子水漂洗四次。

（4）加入0.1%TritonX-100（或30%漂白液+0.1%TritonX-100），放置10分鐘。

（5）用無(wú)菌去離子水*漂洗（至少5次）。

（6）將滅菌的種子移到底部鋪有無(wú)菌濾紙的小Fisher盤（100×15mm）中。

3. 種植

常規(guī)注意事項(xiàng)

請(qǐng)注意你的種子可能在從親本結(jié)出的過(guò)程中攜帶真菌和細(xì)菌，所有的植物種子都需要滅菌，對(duì)來(lái)自其他實(shí)驗(yàn)室的植物或種子這一步也是必要的。在我們實(shí)驗(yàn)室臟東西基本來(lái)自于種子（因?yàn)槲覀兪褂脺缇粒ǚ浅Ｈ菀孜ハx(chóng)，請(qǐng)注意一下花。

種植健康的擬南芥在開(kāi)始前，托盤必須干凈，沒(méi)有舊種子及真菌。

（1）將花盆裝滿土。

（2）在托盤中加入無(wú)菌水，水位大約在花盆的1/3-1/2高。土壤吸水時(shí)間至少3小時(shí)。在土表面噴撒無(wú)菌水，保證種子可以置于一個(gè)潮濕的環(huán)境。

（3）將種子轉(zhuǎn)移到花盆中（每個(gè)花盆8-10粒種子，種子間均勻隔開(kāi)）

（4）種植后在托盤上覆蓋一個(gè)保鮮膜，將其纏繞好，以起到保濕作用。

（5）將托盤放在4°C冷室3-5天黑暗處理（5天為佳）

（6）將其移到擬南芥培養(yǎng)箱（保鮮膜依然覆蓋）

（7）在3-4天長(zhǎng)日照下植物會(huì)萌發(fā)。大約5-7天將保鮮膜半開(kāi)，直至兩對(duì)子葉全部長(zhǎng)出。

（8）將保鮮膜移除，一星期澆兩次去離子水（例如周二和周五）

注意

（1）擬南芥對(duì)所有逆境都很敏感，所以請(qǐng)只在托盤里沒(méi)有水時(shí)澆水。

（2）當(dāng)植物要進(jìn)入開(kāi)花期，每?jī)尚瞧跐惨淮渭尤?/font>1/4濃度霍格蘭溶液的水，兩次足夠。霍格蘭是富氮培養(yǎng)基，促進(jìn)生殖生長(zhǎng)。

（3）盆栽土具有植物生長(zhǎng)養(yǎng)分（慢速釋放肥），可以支持植物生長(zhǎng)至3個(gè)月。所以請(qǐng)不要過(guò)量施肥。

（4）注意植物開(kāi)始開(kāi)花的階段。此時(shí)盡量控制害蟲(chóng)。

（5）蚜蟲(chóng)是一個(gè)普遍問(wèn)題。噴灑1:100乙酰甲胺磷在染病植株上，重復(fù)噴灑三天。注意不要過(guò)量噴灑，否則會(huì)殺死植物。

（6）當(dāng)植物停止開(kāi)花，將它們移到通風(fēng)的環(huán)境使種子干燥。當(dāng)角果變黃或棕色時(shí)盡可能快收種，盡量少施壓力。

（7）注意：首先，你要清除別的物種的種子，用手指摩擦角果，使種子落到下面的紙上。將種子置于EP管中儲(chǔ)藏，在蓋子上穿一個(gè)洞。種子需在室溫下放置大于一星期以干燥。然后將其置于有干燥劑的密閉容器中。

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